Pb Asetat dan NaOH berfungsi mengubah vitamin B menjadi bentuk tiol karena pereaksi tersebut menjadikan kondisi larutan sampel bersifat basa.

Tiol adalah sebuah senyawa yang mengandung gugus fungsi yang terdiri dari atom sulfur dan atom hidrogen(-SH).

Sebagai analog sulfur dari gugus alkohol (-OH), gugus ini dirujuk baik sebagai gugus tiol ataupun gugus sulfhidril.

Seperti alkohol, secara umum gugus tiol akan terdeprotonasi membentuk RS- (disebut tiolat).